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單倍體胚胎干細(xì)胞被譽(yù)為“基因篩選利器”，但其在日常培養(yǎng)和分化過(guò)程中，常常會(huì)發(fā)生二倍化現(xiàn)象。南開(kāi)大學(xué)藥物化學(xué)生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室?guī)涱I(lǐng)研究員課題組，在小鼠單倍體胚胎干細(xì)胞中引入外源抗凋亡基因BCL2，成功構(gòu)建了BCL2過(guò)表達(dá)(BCL2-OE)的小鼠單倍體胚胎干細(xì)胞系(haESCs)，可以在體內(nèi)外分化等嚴(yán)苛條件下長(zhǎng)期維持其單倍性，進(jìn)一步“擦亮”了單倍體細(xì)胞這一“基因篩選利器”。日前，介紹該成果的論文在線發(fā)表于生物學(xué)領(lǐng)域?qū)W術(shù)期刊《細(xì)胞增殖》上。

真核生物的遺傳信息一半來(lái)自于父本，一半來(lái)自于母本，這種“雙備份”可以在遺傳過(guò)程中抵御不良突變，保障物種繁衍。而只有一套染色體的單倍體細(xì)胞，沒(méi)有基因“備份”，人們對(duì)任意基因的更改，都會(huì)直接體現(xiàn)于表型的改變。這對(duì)于探索生命現(xiàn)象、破解基因密碼十分有利。

因此單倍體胚胎干細(xì)胞自問(wèn)世以來(lái)，被廣泛應(yīng)用于各種病毒受體、藥物靶點(diǎn)、生物發(fā)育現(xiàn)象等關(guān)鍵調(diào)控基因的篩選。

然而，這一類人造純合子的工具細(xì)胞，在日常培養(yǎng)或分化過(guò)程中，傾向于自發(fā)二倍化，進(jìn)而喪失了單拷貝基因組的優(yōu)勢(shì)，嚴(yán)重影響其發(fā)揮“基因篩選利器”的功能。因此，在日常培養(yǎng)中，需要不斷通過(guò)基于DNA含量的流式分選技術(shù)對(duì)單倍體加以富集和維持，極大限制了單倍體細(xì)胞更為廣泛的應(yīng)用。

如何從根本上抑制二倍化，高效維持單倍體胚胎干細(xì)胞的單倍性成為干細(xì)胞研究領(lǐng)域的重要課題。

帥領(lǐng)介紹：“基于前期的積累和經(jīng)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生可能是單倍體細(xì)胞發(fā)生二倍化的一個(gè)核心因素。因此，我們?cè)O(shè)想通過(guò)引入外源性的抗凋亡基因BCL2，以期獲得能夠高效維持單倍性的細(xì)胞系。”

研究中，帥領(lǐng)課題組對(duì)抗凋亡基因——BCL2-OE的haESCs在抗凋亡、基因組穩(wěn)定性和分化發(fā)育潛能等方式進(jìn)行了全面論證，發(fā)現(xiàn)BCL2-OE可有效提高細(xì)胞在多種嚴(yán)苛條件下的抗凋亡和單倍性維持能力，并且不影響其胚胎干細(xì)胞增殖分化的潛能。

研究人員基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的分析發(fā)現(xiàn)，抗凋亡之所以可高效抑制單倍體細(xì)胞的自發(fā)二倍化，是因?yàn)锽CL2-OE有效激活了透明質(zhì)酸合成酶基因Has2的表達(dá)，并通過(guò)調(diào)控提高細(xì)胞的抗凋亡能力和單倍性維持能力。在單倍體胚胎干細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Has2同樣可以高效維持單倍性。

“我們這項(xiàng)工作不僅證實(shí)了單倍體胚胎干細(xì)胞在理論上可以單倍體的形式分化到任意一種細(xì)胞類型，也全面推動(dòng)了單倍體篩選系統(tǒng)在更多種類的細(xì)胞類型中進(jìn)行譜系特異性篩選的發(fā)展，為推廣單倍體細(xì)胞在藥物篩選、細(xì)胞分化等方向的靶點(diǎn)篩選提供了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。”帥領(lǐng)說(shuō)。

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